病原學(xué)診斷是生豬養(yǎng)殖中豬支原體肺炎疾病診斷的有效措施，主要是通過在無菌的條件下收集患病豬只肺臟病變部位的組織材料，隨后在A26液體培養(yǎng)基或者固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，肺炎支原體的初次分離通常使用液體培養(yǎng)基，分離后轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基中，肺炎支原體的培養(yǎng)難度較大，通常菌落很小，肺炎支原體菌落通常呈圓形，呈現(xiàn)為半透明的灰白色，邊緣整齊，同時中間出現(xiàn)乳頭狀的突起，菌落的表面出現(xiàn)許多小的菌落顆粒，大小在200μm左右。肺炎支原體菌落在液體培養(yǎng)過程中可以通過使用酚紅指示劑看是否出現(xiàn)顏色變化來判斷菌體是否正常生長。通過使用姬姆薩染色可以對菌落進行分離診斷，染色后可以發(fā)現(xiàn)呈纖細的車輪狀、戒指狀等多種形態(tài)的病原。

豬支原體肺炎疾病的血清學(xué)診斷措施可以對疾病進行準(zhǔn)確的診斷，是現(xiàn)階段生豬養(yǎng)殖實際生產(chǎn)中常見的實驗室診斷措施，血清學(xué)診斷方法主要分為補體結(jié)合試驗、間接血凝試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗、熒光抗體試驗以及免疫酶結(jié)合技術(shù)等。其中補體結(jié)合試驗在實際養(yǎng)殖生產(chǎn)中與患病豬只的臨床癥狀及病理變化相結(jié)合，可以有效的對疾病進行準(zhǔn)確的診斷。補體結(jié)合試驗主要包括微管補體結(jié)合試驗和微量修正補體結(jié)合試驗，檢測診斷的陽性率與患病豬只的肺部病變有良好的相關(guān)性，但是依舊會出現(xiàn)一定的假陽性和假陰性的情況，所以需要與患病豬只的臨床癥狀表現(xiàn)以及病理變化狀況結(jié)合來進行疾病的確診。

間接血凝試驗是豬支原體肺炎疾病常見的血清學(xué)診斷措施，具有良好的特異性和敏感性，但是由于受到病原感染的豬只血清中可能含有特異性的吸附因子，進而導(dǎo)致溶血的情況，影響診斷的準(zhǔn)確性。

酶聯(lián)免疫吸附試驗是通過檢測患病豬只血清中的肺炎支原體抗體，具有可以進行定量分析，敏感性和特異性高的優(yōu)勢特點，是目前生豬養(yǎng)殖疾病診斷中應(yīng)用最為廣泛的血清學(xué)診斷方法。酶聯(lián)免疫吸附試驗相比補體結(jié)合試驗和間接血凝試驗的抗體效價高10～30倍，同時對患病后期的生豬檢測中，抗體效價依舊在很高的水平。酶聯(lián)免疫吸附試驗在豬只感染病原后的2周內(nèi)即可檢測到相應(yīng)的抗體，通常在3～5周左右可以獲得良好的敏感性，對于接種感染的患病豬只，酶聯(lián)免疫吸附試驗在接種后1年還能檢測到抗體。

熒光抗體技術(shù)使用于生豬養(yǎng)殖中急性型支原體肺炎疾病感染的診斷，此時患病豬只肺部出現(xiàn)大量的支原體病原，而在急性型支原體肺炎患病豬只癥狀獲得緩解，或者逐漸轉(zhuǎn)化為慢性型時，由于患病豬只機體中支原體病原數(shù)量較少，使用熒光抗體技術(shù)容易導(dǎo)致假陰性的情況。

免疫酶檢測技術(shù)是用酶聯(lián)免疫過氧化物和間接過氧化物酶試驗來對患病豬只肺部組織中肺部支原體進行檢測，避免了前文中熒光抗體試驗檢測中不能有效檢測慢性豬只等缺陷。使用免疫酶檢測技術(shù)制作冰凍切片或者患病豬只支氣管涂片時，可以發(fā)現(xiàn)支原體病原被染色為紅褐色的不規(guī)則顆粒。研究發(fā)現(xiàn)，通過使用甲醛固定后，再使用石蠟包埋，利用間接過氧化物酶試驗可以檢測肺炎支原體，使用顯微鏡即可觀察到結(jié)構(gòu)清晰的支原體病原，同時樣品還能長時間保存，用于后續(xù)的進一步檢測工作，相比熒光抗體檢測方法更加敏感，所以對于沒有新鮮患病豬只組織樣品時可以采取免疫酶檢測技術(shù)進行疾病的診斷。